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動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟
  • 更新日期:2024-08-27      瀏覽次數(shù):256
    • 動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)條件

      1、無菌、無毒的環(huán)境:對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理,通常還要在培養(yǎng)液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外應定期更換培養(yǎng)液,以便清除代謝產(chǎn)物防止細胞代謝產(chǎn)物累積對細胞自身產(chǎn)生危害。

      2、營養(yǎng)物質(zhì):無機物(無機鹽、微量元素等),有機物(糖、氨基酸、促生長因子等)

      3、血清和血漿(
      提供細胞生長必須的營養(yǎng)成份)


      4、溫度和pH(36.5±0.5℃,7.2~7.4)

      5、氣體環(huán)境(95%的空氣+5%CO?的混合氣體)

      6、其中5%CO?氣體是為保持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定

      動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟

      注:所有步驟應在無菌無毒的超凈工作臺進行。胰蛋白酶處理時間不宜過長。

      取離體的動物組織,器官或細胞,剪碎并加入胰蛋白酶分解成單個細胞,配置形成細胞懸液。

      制備動物細胞培養(yǎng)液體培養(yǎng)基(需加入血清,保證無菌無毒),將細胞接種至培養(yǎng)基,放入二氧化碳培養(yǎng)箱中進行初代培養(yǎng)。

      當細胞增殖達到一定程度,出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時,用胰蛋白酶再次處理,并用細胞懸液吹打貼壁生長的細胞。進行細胞計數(shù)。

      依照計數(shù)結果,分瓶培養(yǎng),進行傳代培養(yǎng)。獲得細胞系或細胞株。

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